叁种药用石斛多糖成分的比较研究

2018-05-30 10:38:21 发表

文章来源:浙江大学学报(工学版)2004年238卷第2期:249-252

作者:华允芬陈云龙

浙江大学 生命科学学院 浙江 杭州  

 

研究了细茎石斛细叶石斛和铁皮石斛叁种药用植物石斛在多糖质量分数分布组成以及分子相对质量大小上的差异运用糖含量测定方法分析叁种石斛不同部位的总多糖 TPs和水溶性多糖WPs运用糖醛酸和蛋白质质量分数测定离子交换柱色谱以及凝胶柱色谱方法分析分析表明铁皮石斛TPsWPs质量分数均为最高细叶石斛WPs质量分数明显低于其他两种叁种石斛多糖在各部位分布情况存在差异不同石斛的WPs组成和分子相对质量大小也不同分析证实叁种药用石斛在多糖质量分数分布组成及分子相对质量大小上具有明显差异

关键词 细茎石斛细叶石斛铁皮石斛多糖

 

石斛味甘微寒无毒入胃肾经具有滋阴清热生津益胃润肺止咳益精补肾壮筋补虚之功效为传统名贵中药其来源植物有70多种铁皮石斛细茎石斛以及细叶石斛为药用石斛的重要来源植物现代科学研究表明石斛的药理作用与其所含多糖有着密切关联有关药用石斛多糖含量方面的研究已有文献报道

为了进一步了解不同石斛植物中多糖的差异,本文对上述叁种石斛中的多糖质量分数,组成及相对分子质量大小作一研究。

 

1实验部分

1.1材料和仪器

铁皮石斛( Dendrobium officinale Kimura etligo)、细茎石斛( Dendrobium moniliforme(L.)Sw.)、细叶石斛( Dendrobium hancockii rolfe),均为多年生全草,20005月中旬采自云南,经淅江大学植物科学研究所傅承新教授鉴定。全草洗净,杀青后于60C烘箱中烘干,一部分根据长度比例分为茎上、茎中、茎下、根四部分分别粉碎,其余部分全草粉碎,60目筛备用Waters高效液相色谱仪, Waters-2410示差折光检测仪;LKB柱色谱系统;RE-52A型旋转蒸发仪; Shimadzu Uv-265FW型紫外可见分光光度计;Sephacryl S-400HRSephacryl S-200HRAmersham Pharmacia Biotech产品; Dextran系列为Flu-ka产品;DEAE-纤维素为上海恒信生化有限公司产;其余试剂为国产分析纯。

 

1.2实验方法

1.2.1石斛多糖质量分数测定石斛样品粉末经乙醇回流提取小分子杂质后,干燥,称取1.000g,100mL提取液,90C恒温水浴3h,加水补重,过滤,取部分滤液稀释,结果按硫酸-苯酚比色法测定其质量分数.以水提取的多糖记为水溶性多糖(wa-ter soluble polysaccharides WPS),5E.0. 15 mol/L硫酸溶液提取总多糖( total polysaccharides Tps),每个样品平行处理3,取平均值。

1.2.2 多糖获得 石斛全草粉末经 95%乙醇提取后,20倍体积水,90C,每次1h,提取3,过滤,合并滤液,减压浓缩,4倍乙醇体积沉淀数次,再溶解,浓缩,透析,冻干,得石斛多糖。

1.2.3糖醛酸质量分数测定按文献方法,以标准氢氧化钠滴定,结果换算成葡糖醛酸。

1.2.4蛋白质质量分数测定 Lowry法。

1.2.5多糖离子交换柱色谱分析离子交换柱色谱:DEAE纤维素(3.5cm×55cm);柱温:12C;流速:2ml./min;流动相:NaCl溶液;梯度模式:时间梯度为02004006008001000min,相应NaCl浓度梯度为00.050.10.20.30.5mol/L;苯酚硫酸法检测洗出峰中性糖质量分数测定:收集水洗脱峰,浓缩,冻干,获得物记为中性糖.称重,计算中性糖在多糖中所占比例

1.2,6多糖凝胶柱色谱分析中性糖部分经Sephacryl s-400(2. 6 cm X60 cm), Sephacryl $-200(1.6cm×20cm)凝胶渗透柱色谱纯化,紫外扫描检测其蛋白质量分数.收集洗脱峰部分,浓缩,冻干,获得物和标准多糖 Dextran系列经 HPGPC分析(Ultrihydrogen M2502000二柱串联,流动相:0.1mol/L磷酸缓冲液),由标准多糖的相对分子质量对数与洗脱体积求得标准曲线,再由标准曲线求得样品的重均相对分子质量。

 

2 结果与讨论

2.1 石斛不同部位多糖质量分数分析

叁种石斛不同部位多糖质量分数的测定结果见 1

42c87195bf152e7b8bec3731cc44ff0.png

测定结果表明,叁种石斛的总多糖质量分数均比较,其中铁皮石斛高于其他两种;而且不同部位的总多糖质量分数分布有较大差异:细茎石斛由高到低依次为上、下、中、根部,细叶石斛依次为上、中、下、根部,铁皮石斛为中、上、下、根部,叁种石斛的水溶性多糖质量分数以铁皮石斛为高,细茎石斛次之,细叶石斛最低,它们占全草总重分别为15.02%12.31%4.45%,这与细叶石斛口感味淡相吻合; 同样,不同部位的水溶性多糖质量分数分布也有差异;细茎石斛以上部最高,依次为下、中、根部,且差异不大。

 

2.2 多糖成分差异分析

叁种石斛水溶性多糖中的中性唐、糖醛酸以及蛋白质质量分数存在明显差异,见表2.

22240d57e08343743dd6fb500657903.png

2.3多糖离子交换柱色谱分析

叁种石斛水溶性多糖分别经DEAE-纤维素柱色谱分析,依次以水以及0.050.10.20.30.5mol/ L. Nacl溶液梯度洗脱,获得6个洗脱组分,记为组分1(中性糖)I、Ⅱ、NV、Ⅵ.除组分I占绝大部分,其他组分洗脱峰见图1,由图1可知,细茎石斛、细叶石斛均为组峰』、Ⅳ为高,其余较低;而铁皮石斛则是组峰Ⅲ为高,呈现明显不同的特征,最高峰比较,细叶石斛(1.0)高于细茎石斛(0.9),铁皮石斛(0.8)最低,与糖醛酸质量分数分析结果一致。

86fca2a00bdb539c60e4265cc5201fa.png

2.4多糖凝胶柱色谱分析

叁种石斛中性糖经 Sephacryl系列纯化后,经紫外扫描,发现在280nm处无吸收峰,表明其不含蛋白或质量分数甚微;HPGPC中均呈现为单对称峰,表明其为均一多糖组分,根据标准曲线logM=1.10e-3.27t/e,=0.993(t为保留时间)求得细茎石斛、细叶石斛、铁皮石斛中性糖的重均相对分子量分别为2.8×1043.0×10412.8×104Da,上述数据表明,铁皮石斛中性糖的相对分子质量远大于细茎石斛和细叶石斛的相对分子质量。


结语

细茎石斛、细叶石斛和铁皮石斛均含有较高的总多糖,但水溶性多糖质量分数以铁皮石斛和细茎石斛为高,细叶石斛很低(仅为前二者的1/3),而且总多糖和水溶性多糖在各部位的分布情况亦有较大差异,水溶性多糖中蛋白质、糖醛酸以及中性糖等成分的质量分数也不同.从水溶性多糖的柱色谱分析,铁皮石斛和其他两种石斛相比同样具有显着差异至于叁种码斛新糖在分子结构方面的差异有待进一步研究。